发光检测

荧光检测

科学仪器目录

RNA干涉(RNAi)效率发光法检测

阅 8190次 / 原平皓生物

简介:

        RNAi (RNA interference) 即RNA干涉,是由双链RNA(dsRNA)介导的、由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。在RNAi研究中,我们可以人工合成特定的dsRNA,对目的基因进行干涉。但设计的dsRNA不同,实际干涉效果差异很大。所以有时候就需要筛选dsRNA片断。

        PsiCHECK载体将RNAi与荧光素酶发光相偶联:当RNAi有效时,转录的荧光素酶RNA将被降解,无发光反应;当RNAi无效时,转录的荧光素酶RNA将翻译为荧光素酶,并参与发光反应。通过检测发光即可反应RNAi的效果。

        以PsiCHECK-2载体为例:将RNAi的靶片段插入到hRlu片段下游的多克隆位点中,然后将构建好的载体与特定的dsRNA片段或能转录dsRNA的载体共转染进细胞;转然后,细胞培养一定时间,裂解细胞使用发光检测的方法检测荧光素酶的表达情况。

原理:

 

检测方法:

详见附录

参考文献:

  1. Kumar, R., Conklin, D.S. and Mittal, V. (2003) High-throughput selection of effective RNAi probes for gene silencing. Genome Res. 13, 2333–40.
  2. Brummelkamp, T.R., Bernards, R. and Agami, R. (2002) A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian cell. Science 296, 550–3.
*如果您在实验中遇到任何问题, 请与我们的技术人员沟通, 我们将提供帮助.
联系电话: 010-5158 2336转803 电子邮箱: helpyph-bio.com