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基于caspase酶的细胞凋亡检测

阅 6913次 / 原平皓生物
关键词: 发光检测, Luciferase, 荧光素酶, 细胞凋亡, Caspase

简介：

        Caspase 是一类半胱氨酸蛋白水解酶,具有半胱氨酸激活位点和底物裂解位点。Caspase 家族的一个重要的共同点就是特异性地断开目的蛋白天冬氨酸残基后的肽链。Caspase 是细胞凋亡的核心成分,在程序性细胞死亡中起到重要作用。由于Caspase 本身可以自我活化并相互激活,因此凋亡过程一旦触发,即呈现级联放大效应。
        根据Caspase在级联反应上下游的位置及功能的不同可将Caspase 家族大致分为两种类型: I 型Caspase ,又称为启动型Caspase ( InitiatorCaspase) ,包括Caspase - 2、Caspase - 8、Caspase - 9、Caspase - 10等,位于Caspase 级联反应的*上游,能在其他蛋白辅助因子的参与下发生自我活化并激活下游的Caspase ; II 型Caspase ,又称为执行型Caspase ( Executioner Casepase) ,包括Caspase - 3、Caspase - 6、Caspase - 7 等,其作用在于特异性地裂解底物使细胞发生生化及形态学改变,*终导致细胞凋亡。除此之外,还有一类Caspase 包括Caspase - 1、Caspase - 4、Caspase - 5、Caspase- 13、Caspase - 14 等,主要参与细胞因子介导的炎症反应并在死亡受体介导的细胞凋亡途径中起辅助作用 。
        将Caspase的酶促反应与荧光素酶发光反应相偶联，即可使用检测发光强度的方法来检测Caspase 酶的活性。

原理：

检测方法：

以Caspase-GloTM3/7检测试剂盒为例

1. 试剂准备
Caspase-GloTM3/7检测液制备：将Caspase-GloTM3/7的底物与buffer混合，使用前平衡到室温。

2. 样品准备
a) 将细胞培养板平衡到室温，向细胞培养物中加入等体积的Caspase-GloTM3/7检测液（96孔细胞培养板一般为100ul），
b) 低速震荡混合30s，孵育30min

3. 检测结果
孵育结束后，取反应液放入发光检测仪中检测发光值。

参考文献：

  1. Larson, B. and Worzella, T. (2005) Perform multiplexed cell-based assays on automated platforms. Cell Notes 12, 13–6.
  2. Bayascas, J.R. et al. (2002) Isolation of AmphiCASP-3/7, an ancestral caspase from amphioxus (Branchiostoma floridae). Evolutionary considerations for vertebrate caspases. Cell. Death Differ. 9, 1078–89.

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